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時間：2021-08-17 11:18:00
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編輯：乙肝新聞
由于技術發展所限，現有技術手段還沒辦法徹底根除細胞內的乙肝病毒（HBV）cccDNA，cccDNA在細胞內的持續存在給乙肝病毒蛋白的持續表達提供了源泉，并且致使部分慢性乙型肝炎病毒感染發展為肝癌，提示目前的治療策略仍有較大的局限性，需要開發新的治療策略以解決問題。
基因沉默技術在處理乙肝病毒感染上有可能是一項有價值的策略，乙肝病毒（HBV）X基因（HBX）由于其末端共定位（co-terminallocalization），可能是一個基因沉默技術最佳的靶標。
在2021年的歐洲肝病學會年會上，來自巴塞羅那瓦勒德希伯倫大學醫院（VallD’hebronUniversityHospital）等研究機構的研究人員介紹了一種基于反義鎖核酸(LNA)Gapmer(GP)和靶向HBX超保守區域的siRNA基因治療策略。
首先，研究人員將HepG2-NTCP細胞用2.5％DMSO處理至少14天，然后通過在37oC環境下以500個基因組當量的HBV進行感染旋轉接種（spinoculation）1h，并孵育過夜。在感染后第48h或第5天，使用TransIT-X2（Mirus）用Gapmer（GP）（50nM的GP1和/或GP4，Qiagen）和/或siRNA（50nM）處理感染的細胞。每個實驗中都使用了一個加干擾的對照Gapmer。
處理72小時后收集細胞和上清液。通過RNAeasyPlus微型試劑盒（Qiagen）從細胞中提取前基因組RNA（pgRNA），并使用TaqMan探針（Roche，Lightcycler?480）通過RT-qPCR進行定量。通過化學發光酶法（Roche，COBAS?8000）對上清液中的HBsAg和HBeAg進行定量。
研究結果顯示，感染后早期（在感染后48h時），GP1處理使pgRNA、HBeAg和HBsAg的抑制率均超過70%（分別為75.5±9.9%；74.7±6.4%和72.4±7.7%）。
不同的是，GP4的抑制作用比GP1低7.4到13個百分點（pgRNA、HBeAg和HBsAg分別為62±17%；66.1±11.2%和64.7±12%）。
當GP在感染后稍晚期（感染后第5天）引入時，GP1和GP4對pgRNA的抑制作用均降低（分別為53.5±29%和58.5±17%）。
如果考慮病毒蛋白表達，則效率較低（兩種GP均低于48%）。
值得注意的是，兩種GP或GP與siRNA的組合提高了pgRNA的抑制效率（GP1+GP4；GP1+siRNA；GP4+siRNA分別為69.1±16.5%；66.7±12.2%；63.8±21%），只是部分改善病毒蛋白抑制。
綜上數據，研究認為在體外環境中Gapmers似乎是抑制HBV表達的有價值的分子。通過將GP相互組合或與針對同一超保守區域的siRNA組合，可以提高它們在建立生產性感染(5dpi)后的有限效率。
然而，研究人員認為還需要進一步的實驗來證實這些結果，并測試其他遞送系統以提高治療效率。（更多肝病新藥研究信息敬請關注“肝臟時間”微信公眾號）！
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